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所在平台: Udemy |
课程主页: https://www.udemy.com/course/dna-primer-design-for-pcr/
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课程名称：聚合酶链式反应引物设计技巧与窍门 概述：在本课程中，您将学习以下内容： - 标准聚合酶链式反应（PCR）技术的基本概念 - 设计PCR用DNA引物所需的标准 - 通常用于设计DNA引物的在线程序 - 针对凝胶电泳结果的故障排除技巧 ### 聚合酶链式反应（PCR） 您将在本节中学习： - PCR的步骤（PCR循环）：变性、退火、延伸 - PCR反应的组分：DNA模板、DNA聚合酶、dNTPs、正向引物和反向引物 - PCR扩增程序 - 指数扩增 - 第一次、第二次和第三次循环的PCR扩增产物的大小差异 ### PCR引物设计标准 在本节中，您将详细了解PCR引物设计标准及其如何影响引物的敏感性和稳定性，包括；引物长度、熔解温度（Tm）、退火温度、GC含量、GC夹心、交叉同源性和引物的二级结构。 ### 工具与方法 您将在本节中学习如何： - 从NCBI检索基因序列，并使用图形确定每个外显子的确切位置 - 比较不同的mRNA转录本，选择一个以在新细胞中评估基因表达 - 理解Primer3设置 - 计算引物自互补性分数 - 使用BLAT检查引物交叉同源性 - 根据Delta G评估引物 ### 凝胶电泳故障排除 在本节中，您将找到成功进行凝胶电泳的技巧，包括可能遇到的所有问题及每个问题的解决方案。 通过本课程的学习，您将全面掌握PCR引物设计的基础知识及其应用。
In this course you will learn:The basic concepts of the standard polymerase chain reaction (PCR) technique.The criteria required to design a DNA primer for PCR.The online programs we usually use to design a DNA primer.Tips for troubleshooting gel electrophoresis results. Polymerase chain reaction (PCR) You will learn in this section:Steps involved in the PCR (PCR cycling): denaturation, annealing, extensionComponents of the PCR reaction: DNA template, DNA polymerase, dNTPs, forward primer and reverse primer.PCR amplification program.Exponential amplification.The size difference between the PCR amplification products of the first, second, and third cycle.Criteria for PCR primer designYou will learn in this section a detailed explanation of the PCR primer design criteria and how they affect the primer sensitivity and stability including; primer length, primer melting temperature, primer annealing temperature, GC% of the primer, GC-clamp, cross homology and primer secondary structure. Tools and methods In this section you will learn how to:Retrieve a Gene Sequence form NCBI, and Determine the Exact Location for Each Exon on the Chromosome Using Graphics.Compare Different mRNA Transcripts and Select One to Evaluate a Gene Expression in Novel Cells.Understand Primer3 Setting.Calculate Primer Self-Complementarity Score.Check for Primer Cross Homology Using BLAT.Evaluate Primers Depending on Delta G.Gel Electrophoresis Troubleshooting In this section you will find tips for successful gel electrophoresis. It includes all the possible problems you may encounter, and suggest you a solution for each problem.
